（一）原理

凡鹽析所獲得的粗制蛋白質（鹽析得到的IgG）中均含有硫酸銨等鹽類，這類將影響以后的純化，所以純化前均應除去，此過程稱為“脫鹽”（desalthing）。脫鹽常用透析法和凝膠過濾法，這兩種方法各有利弊。前者的優(yōu)點是透析后析品終體積較小，但所需時間較長，且鹽不易除盡；凝膠過濾法則能將鹽除盡，所需時間也短，但其凝膠過濾后樣品體積較大。所以，要根據具體情況選擇使用。前實驗中樣品體積較小，凝膠達濾后樣品體積不會太增加，所以選用凝膠過濾法。

（二）試劑與器材

（1）Sephadex G-25。

（2）0.0175mol/L，pH6.7磷酸鹽緩沖液。

（3）奈氏（Nessler）試劑：于500ml錐形瓶內加入碘化鉀150g，碘110g，汞150g及蒸餾水100ml。用力振蕩7～15min，至碘的棕色開始轉變時，混合液溫度升高，將此瓶浸于冷水內繼續(xù)振蕩，直到棕色的碘轉變?yōu)閹ЬG色的碘化鉀汞液為止。將上清液傾入2000ml量筒內，加蒸餾水至2000ml，混勻備用。

（4）20%（W/V）磺基水楊酸溶液。

（5）1.5cm×20cm層析柱。

（6）黑、白比色磁盤。

（三）操作

（1）取層析柱1支（1.5cm×20cm），垂直固定在支架上，關閉下端出口。將已經溶脹好的Sephadex G-25中的水傾倒出去，加入2倍體積的0.0175mol/L，pH6.7磷酸鹽緩沖液，并攪拌成懸浮液，然后灌注入柱，打開柱的下端出口，繼續(xù)加入攪勻的Sephadex G-25，使凝膠自然沉降高度到17cm左右，關閉出口。待凝膠柱形成后，在洗脫瓶中加入0.0175mol/L，pH6.7磷酸鹽緩沖液以3倍柱體積的磷酸鹽緩沖流過凝膠柱，以平衡凝膠。

（2）凝膠平衡后，用皮頭滴管除去凝膠柱面的溶液，將鹽析所得全部IgG樣品加到凝膠柱表面，打開柱下口，控制流速讓IgG樣品溶液慢慢浸入凝膠內。凝膠柱面上加一層的0.0175mol/L，pH6.7磷酸鹽緩沖液，并用此緩沖液洗脫，控制流速為0.5ml/min左右。用試管收集洗脫液，每管10滴。

（3）在開始收集洗脫液的同時檢查蛋白質是否已開始流出。為此，由每支收集管中取出1滴溶液置于黑色比色磁盤中，加入1滴20%磺基水楊酸，若呈現白色絮狀沉淀即證明已有蛋白質出現，直到檢查不出白色沉淀時，停止收集洗脫液。

（4）由經檢查含有蛋白質的每管中，取1滴溶液，放置在白色比色盤孔中，加入1滴奈氏試劑，若呈現棕黃色沉淀說明它含有硫酸銨。合并檢查后不含硫酸銨的各管收集液，即為“脫鹽”后的IgG。

上海恒遠生物科技有限公司是中國大陸家專業(yè)經營ELISA試劑盒，人ELISA試劑盒，大鼠ELISA試劑盒，小鼠ELISA試劑盒，裸鼠ELISA試劑盒，倉鼠ELISA試劑盒專賣的公司

上海恒遠生物科技有限公司產品質量信得過，我們將以高度的責任感和出色的產品質量為客戶提供高品質的產品和實驗技術解決方案。豐富的經驗、優(yōu)良的品質、充足的庫存、準確的交貨時間、極具競爭力的價格，所有這些都保證了我們向您提供的是*專業(yè)*優(yōu)質的服務！

原創(chuàng)作者：上海恒遠生物科技有限公司